Determinación Y Caracterización Parcial De Proteasas Obtenidas Del Fruto Thevetia Ahouai (L.) A.Dc  

Hector Graterol 1 , Luis Amaíz 1 , Esther Torquati 1 , Lellys M. Contreras L 1
1Departamento de Biología, Facultad de Ciencias y Tecnología (FACYT), Universidad de Carabobo, Carabobo, Venezuela
Autor de Correspondencia: godofredo9_5@hotmail.com, leamaiz@uc.edu.ve , etorquat@uc.edu.ve , contrera@uc.edu.ve

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Resumen

Se caracterizó la actividad proteolítica de tipo gelatinasa presente en el fruto de Thevetia ahouai (L.) A.DC. por zimografía empleando gelatina como sustrato al 0.2% en SDS-PAGE al 12%. Se determinó el patrón de bandas electroforético en geles de poliacrilamida (SDS-PAGE) al 12%, detectándose la presencia de ocho bandas de 75, 59, 50, 35, 32, 30, 15 y 10 kDa, donde se estimó un peso molecular de 75 kDa para la proteasa detectada. Se observó susceptibilidad al Fenil-metil-sulfonil fluoruro (PMSF) confirmando la presencia de un sitio activo similar a las proteasas del tipo serina. La actividad también se determinó de manera cualitativa en placas de agar con hemoglobina Bovina al 1% p/v, evidenciándose la presencia de halos de hidrólisis. Finalmente se estudiaron algunas propiedades tales como la dependencia de la actividad en relación al pH, con un valor óptimo de 8 y una temperatura óptima de 55ºC.


Palabras claves:

Determination and Partial Characterization of Proteases Isolated of Fruit Thevetia Ahouai (L.) A.DC 

Hector Graterol 1 , Luis Amaíz 1 , Esther Torquati 1 , Lellys M. Contreras L 1
1Departamento de Biología, Facultad de Ciencias y Tecnología (FACYT), Universidad de Carabobo, Carabobo, Venezuela
Autor de Correspondencia: godofredo9_5@hotmail.com, leamaiz@uc.edu.ve , etorquat@uc.edu.ve , contrera@uc.edu.ve

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Abstract

A proteolytic gelatinase activity present in the Thevetia ahoui’s (L.) A.DC fruit was characterized using zymografic methods, in gels using gelatin as substract (0.2 %) in SDS-PAGE (12%). The electrophoretic pattern was determined by SDS-PAGE 12%, and it conformed by eight bands with 75, 59, 50, 35, 32, 30, 15 y 10 kDa. The molecular weight of the proteolytic activity was determinated in a band with 75 kDa. The sensibility to Phenyl – Methyl – Sulphonil - Fluoride confirmed an active site similar to the serin proteases type. The qualitative detection of the activity was carried out in agar plates with bovine hemoglobin (1% w/V) demonstrating a hydrolytic clear shade. Finally biochemical properties like optimum pH and optimum temperature were studied with 9 for pH and 55 ° C for temperature.


Keywords: